d1～11孔均加入含4HAU混匀的病毒抗原液0025毫升，室温（约20℃）静置至少30分钟。
e每孔加入0025毫升的鸡红细胞悬液轻轻混匀，静置约40分钟（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件下1小时），对照红细胞将呈明显的纽扣状沉于孔底。
（3）结果判定以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。
只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。HI价小于或等于3log2判定HI试验阴性；HI价等于4log2为阳性。
46琼脂凝胶免疫扩散（AGID）试验具体怎样操作和判定结果？
琼脂扩散试验具体操作和结果判定程序如下：
（1）材料准备
① 硫柳汞溶液、pH72的001摩尔/升 PBS液。
② 制作琼脂板。
③ 禽流感琼脂凝胶免疫扩散抗原、标准阴性和阳性血清。
（2）操作方法
① 打孔。在制备的琼脂板上按7孔一组的梅花形打孔（中间1孔，周围6孔），孔径约5毫米，孔距2～5毫米，将孔中的琼脂用8号针头斜面向上从右侧边缘插入，轻轻向左侧方向将琼脂挑出，勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。
② 封底。用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂刚刚要熔化为止，封闭孔的底部，以防侧漏。
③ 加样。用微量移液器或带有6～7号针头的025毫升注射器，吸取抗原悬液滴入中间孔（下页图中的⑦号），标准阳性血清分别加入外周的①和④孔中，被检血清按编号顺序分别加入另外4个外周孔（下页图中的②、③、⑤、⑥号孔）。每孔均以加满不溢出为度，每加一个样品应换一个滴头。
④ 作用。加样完毕后，静置5～10分钟，然后将平皿轻轻倒置放入湿盒内，37℃温箱中作用，分别在24小时、48小时和72小时观察并记录结果。
（3）结果判定
① 判定方法。将琼脂板置日光灯或侧强光下观察，若标准阳性血清（图中的①和④号孔）与抗原孔之间出现一条清晰的白色沉淀线，则试验成立。
② 判定标准
a若被检血清孔（如图中的②号）与中心抗原孔之间出现清晰致密的沉淀线，且该线与抗原和标准阳性血清之间沉淀线的末端相吻合，则被检血清判为阳性。
b被检血清孔（如图中的③号）与中心孔之间虽不出现沉淀线，但标准阳性血清孔（如图中的④号）的沉淀线一端向被检血清孔内侧弯曲，则此孔的被检样品判为弱阳性（凡弱阳性者应重复试验，仍为弱阳性者，判为阳性）。
c若被检血清孔（如图中的⑤号）与中心孔之间不出现沉淀线，且标准阳性血清沉淀线直向被检血清孔，则被检血清判为阴性。
d被检血清孔（如图中的⑥号）与中心抗原孔之间沉淀线粗而混浊或标准阳性血清与抗原孔之间的沉淀线交叉并直伸，被检血清孔为非特异反应，应重做，若仍出现非特异反应则判为阴性。
47确定高致病性禽流感的诊断标准是什么？
诊断指标主要包括以下三个方面：
（1）临床诊断指标
① 急性发病死亡；② 脚鳞出血；③ 鸡冠出血或发绀、头部水肿；④ 肌肉和其他组织器官广泛性严重出血。
（2）血清学诊断指标
①H5或H7的血凝抑制（HI）效价达到24及以上；② 禽流感琼脂免疫扩散（AGP）试验阳性（水禽除外）。
（3）病原学诊断指标
①H5或H7亚型病毒分离阳性；② H5或H7特异性分子生物学诊断阳性；③ 任何亚型病毒静脉内接种致病指数（IVPI）大于12。
根据以上诊断指标来判定，结果判定包括以下三个方面：
（1）临床怀疑为高致病性禽流感符合临床诊断指标1，且至少有临床诊断指标2、3、4之一。
（2）疑似高致病性禽流感符合结果判定（1），且符合血清学诊断指标①或/和②。
（3）确诊符合结果判定（2），
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